Publicado em: 12 de março de 2019
Pesquisadores introduziram mudanças genéticas em células T humanas que as tornam virtualmente imunes à infecção pelo HIV, e a carga viral em pessoas HIV-positivas que são inoculadas com essas células retorna mais lentamente quando elas são retiradas da terapia, a recente Conferência sobre Retrovírus e Infecções oportunistas (CROI 2019) ouvidas.
O desafio agora é aumentar a proporção de células no corpo que têm o gene da imunidade adicionado. Isso pode resultar em uma cura funcional do HIV, com o vírus incapaz de se replicar mesmo na ausência de medicamentos para o HIV.
A principal história do CROI 2019 foi que uma segunda pessoa pode ter sido curada da infecção pelo HIV. Mas a maioria dos relatórios também enfatizou que o procedimento de transplante de medula óssea que alcançou esta cura, e o anterior de Timothy Ray Brown há 12 anos, é perigoso, caro e não é algo que jamais seria tentado em um paciente que não tem câncer.
Então, um feito semelhante pode ser alcançado com mais segurança? Resultados promissores em experimentos com animais produziram macacos que parecem ter a maior parte do DNA do HIV removido de suas células .
Mas um segundo estudo, desta vez em humanos, reproduziu a mudança genética que curou os dois pacientes mais exatamente, e por meio de uma técnica segura e repetível. Os dois pacientes curados tiveram suas células T substituídas por outras de doadores com uma mutação genética chamada CCR5-delta 32 que significa que suas células não têm a molécula do receptor CCR5 em sua superfície que a maioria das cepas do HIV precisa anexar antes que elas possam infectar uma célula.
No experimento apresentado pelo Dr. Pablo Tebas, da Universidade da Pensilvânia, na Filadélfia, células-T coletadas de 15 pessoas com HIV foram cultivadas em laboratório com uma enzima de edição genética chamada nuclease do dedo de zinco (ZFN). Isso modificou seu gene CCR5, de modo que ele mudou para a variante resistente ao HIV. As células foram então reintroduzidas nos pacientes no que é chamado de transplante autólogo - ou seja, o transplante modificado vem do próprio paciente, portanto não deve haver problema com a rejeição.
Esta não é uma nova tecnologia: as enzimas ZFN foram usadas para modificar células em experimentos originalmente relatados ao CROI em 2011 . Nesse experimento, um vetor viral - o invólucro de um vírus de resfriado comum - foi usado para introduzir a enzima ZFN nas células. As células negativas CCR5 reintroduzidas constituíam inicialmente cerca de 22% da população de células T, mas foram substituídas ao longo do tempo pelas próprias células positivas para CCR5 dos pacientes.
O conjunto atual de experimentos, no entanto, usou uma técnica diferente chamada eletroporação para obter as ZFNs nas células. O problema com o uso de vetores virais é que as células desenvolvem imunidade a elas para que possam ser usadas apenas uma vez. A eletroporação pode ser usada muitas vezes para criar múltiplos ciclos de células modificadas que podem ser inoculadas. Nesta técnica, as células T são incubadas ao lado das enzimas ZFN em câmaras na presença de uma corrente elétrica. Isso faz com que as paredes celulares se tornem permeáveis e as ZFNs ou outras substâncias que se deseja introduzir se difundirão na célula.
Além de usar uma técnica diferente e repetível para criar células T negativas CCR5 autólogas, as experiências exploraram algumas outras possibilidades. Primeiramente, a proporção de células T modificadas no corpo poderia ser aumentada se uma dose baixa de um medicamento imunossupressor (ciclofosfamida) fosse usada antes da inoculação, para reduzir o número de células positivas para o CCR5 no corpo? E em segundo lugar, enquanto apenas 1% das pessoas de ascendência do norte da Europa têm duas cópias do gene CCR5-delta 32, o que significa que são virtualmente imunes ao HIV, uma proporção maior - até 20% - tem uma cópia desse gene chamada heterozigose). Eles teriam uma resposta melhor?
Havia 15 pessoas neste estudo, em cinco grupos de três. Três pessoas não receberam ciclofosfamida. Seis pessoas - três heterozigotas para o CCR5 e três sem cópias da mutação delta-32 - receberam uma dose menor de ciclofosfamida e seis pessoas receberam uma dose maior. As doses não foram altas o suficiente para criar uma toxicidade significativa e foram mais ou menos as mesmas usadas para tratar a doença autoimune lúpica, disse o Dr. Tebas.
A criação das células T negativas para CCR5 levou cerca de dez semanas e a ciclofosfamida foi dada dois dias antes da infusão das células. Oito semanas mais tarde, os pacientes, que eram todos portadores de HIV com altas contagens de CD4 (contagem mediana de CD4 831 cópias / mm 3 ), interromperam a terapia antirretroviral (TARV). A interrupção analítica do tratamento (ATI) foi por um período fixo de 16 semanas, embora, se as pessoas ainda tivessem uma carga viral baixa após esse período, tivessem a opção de estender a ATI. Descobriu-se que uma pessoa do grupo CCR5-hetereozigoto, de fato, continuava tomando ART e foi excluída da análise.
Não houve eventos adversos significativos relacionados à terapia do estudo. A técnica de eletroporação em dose única foi pelo menos tão eficaz quanto usando o vetor de adenovírus: imediatamente após a infusão, 25% das células T dos participantes foram CCR5 negativo.
Não houve casos de remissão viral neste estudo: durante a ATI, a carga viral do HIV em todos os indivíduos reapareceu e a proporção de células T que eram CCR5-negativas diminuiu lentamente. Houve uma tendência para os indivíduos heterozigóticos para CCR5 reterem uma proporção mais elevada de células inoculadas com CCR5 negativo. Às quatro semanas, antes da ATI, a proporção de células T que foram modificadas foi de 4,6% e 4,1% nos dois grupos homozigóticos (ambos os genes CCR5-positivos), mas 7,4% no grupo heterozigótico, e na semana 24, quatro semanas após a ATI, as proporções foram de 2,2%, 2,6% e 4,6%, respectivamente.
A ciclofosfamida parece não fazer diferença para o tempo de rebote viral.
As cargas virais dos pacientes heterozigotos também reapareceram mais lentamente. Considerando que 50% dos pacientes homozigotos já tinham uma carga viral detectável de quatro semanas em sua ATI, levou todas as 12 semanas antes de três em cada cinco dos pacientes heterozigotos.
Três sujeitos tiveram baixas cargas virais no final da ATI e decidiram prolongá-la. Um paciente homozigótico tinha uma carga viral indetectável no final da ATI e atrasou o reinício até 12 semanas mais tarde, com uma carga viral de 10.000 copes / ml. Dois dos doentes heterozigóticos tinham cargas virais na região de 1000 cópias / ml e não reiniciaram a TAR até às 20 e 32 semanas após a sua ATI, respectivamente, com cargas virais de 8000 cópias / ml.
Portanto, embora este experimento não tenha produzido pacientes com supressão viral prolongada, isso é uma demonstração de uma maneira mais segura, mais repetitiva e não tóxica de criar uma população de células T resistentes ao HIV que podem ser infundidas de volta no corpo e que podem em certa medida, atrasam o rebote viral do HIV, mesmo quando eles formam apenas menos de 10% do complemento de células T do corpo.
Questionado sobre as etapas futuras, o Dr. Tebas disse que em vez de simplesmente repetir as mesmas técnicas para projetar células CCR5-negativas, sua equipe investigaria usando tecnologia ZFN para gerar células sem o outro co-receptor de HIV, C4CR4, e eventualmente para gerar TCRs. Células - Células Receptoras de Antígeno Quimérico, um tipo de célula T artificialmente projetada já em uso na terapia anti-câncer que será capaz de procurar e destruir células T infectadas pelo HIV.
http://www.aidsmap.com/page/3466253/
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